K-RAS热点突变检测试剂盒
1、检测意义
临床上靶向新药爱必妥（Erbitux，西妥昔单抗）和帕尼单抗（Panitumumab）仅适用于无突变的K-RAS基因野生型患者，对K-RAS突变患者无效。美国国立综合癌症网络（NCCN）将K-RAS检测列为《结肠癌临床治疗指南》。
本试剂盒主要用于高灵敏度、高通量、低成本检测K-RAS突变，协助临床医生筛选爱必妥、帕尼单抗的有效患者，实现肿瘤病人的个体化治疗，降低治疗风险以及患者负担。
2、技术方法
本试剂盒采用新型突变研究技术——高分辨率熔点曲线分析（High Resolution Melting Analysis，HRM），无需序列特异性探针，无需测序，也不受突变碱基位点与类型的局限，应用Roche LlightCyclerTM 480荧光定量PCR仪器分析，即可完成对样品基因型的判断。
3、检测样品
n 石蜡包埋组织或切片；
n 血浆、血清等非细胞体系的游离DNA；
n 组织标本包括新鲜、液氮冻存、酒精固定和RNAlater保存的各种手术样本；
n 穿刺活检的各种方式保存的样本；
n 各种体液样本包括胸腹水、痰液、血液中细胞DNA检测；
4、适用范围
结肠癌、胃癌、头颈癌、非小细胞肺癌患者，用于爱必妥或帕尼单抗等靶向药物的适用人群筛选。
5、新功能
非侵入性检测K-ras在血清游离DNA中的突变情况，从而可实现动态检测肿瘤变化，评价病人对靶向药物的治疗反应。
结肠癌、胰腺癌组织中多有K-ras突变，由于HRM技术实现了血清或血浆检测突变，因此检测血液或粪便中K-ras突变也可适用于这些癌症的早期筛查（Gastroenterology. 2009;136(2):459-70）。
6、技术特点
n 高通量：1次可检测10-300个样本，国内首次实现高通量检测。
n 高敏度：HRM检测灵敏度能达到1%-0.1%，是传统“PCR+测序”方法的25-250倍。
n 特异性好：PCR产物无需后续处理，特异性达100%；
n 重复性好：实验闭管进行，避免交叉污染。
n 精确度高：精确获得K-RAS基因多个位点状况，包括已知的7个热点突变（第12编码子核苷酸突变，第13编码子核苷酸突变和第61编码子核苷酸突变），也可同时侦测未知突变。
n 适用范围广：可用于新鲜或酒精固定、石蜡包埋的手术标本，也可用于微量的穿刺或活检标本、血液标本、粪便标本等非手术标本的检测。而传统“PCR+测序”方法对大部分不能手术的患者难以检测。
7、试剂盒规格
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产品编号 |
产品名称 |
规格 |
价格 |
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WZ-K12 |
K-RAS热点突变检测试剂盒（HRM） |
12人份 |
询价 |
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WZ-K24 |
K-RAS基因突变检测试剂盒（HRM） |
24人份 |
询价 |
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WZ-K48 |
K-RAS基因突变检测试剂盒（HRM） |
48人份 |
询价 |
试剂盒组成：含引物、Mg2+、Hotstar-Taq酶和荧光探针混合液的试管（1管），阴性对照（1管），阳性对照（1管），去离子水（1管）。检测外显子2的密码子12和13，占所有突变的98%。说明书一份。
8、参考文献
n Zou H, Taylor WR, Harrington JJ, et al. High detection rates of colorectal neoplasia by stool DNA testing with a novel digital melt curve assay. Gastroenterology. 2009;136(2):459-70.
n Kramer D, Thunnissen FB, Gallegos-Ruiz MI, Smit EF, Postmus PE, Meijer CJ, Snijders PJ, Heideman DA. A fast, sensitive and accurate high resolution melting (HRM) technology-based assay to screen for common K-ras mutations. Cell Oncol. 2009;31(3):161-7
n Simi L, Pratesi N, Vignoli M, Sestini R, Cianchi F, Valanzano R, Nobili S, Mini E, Pazzagli M, Orlando C. High-resolution melting analysis for rapid detection of KRAS, BRAF, and PIK3CA gene mutations in colorectal cancer. Am J Clin Pathol. 2008;130(2):247-53.
n Do H, Krypuy M, Mitchell PL, Fox SB, Dobrovic A. High resolution melting analysis for rapid and sensitive EGFR and KRAS mutation detection in formalin fixed paraffin embedded biopsies. BMC Cancer. 2008;8:142.
n Krypuy M, Newnham GM, Thomas DM, Conron M, Dobrovic A. High resolution melting analysis for the rapid and sensitive detection of mutations in clinical samples: KRAS codon 12 and 13 mutations in non-small cell lung cancer. BMC Cancer. 2006; 21;6:295.
n Crook S, Seth R, Jackson D, Ilyas M. Concomitant mutations and splice variants in K-RAS and BRAF demonstrate complex perturbation of the Ras/Raf signalling pathway in Colorectal Cancer. Gut. 2009; 26.