猪蓝耳病毒(PRRSV)酶联免疫分析(ELISA)-分析方法-资讯-生物在线

猪蓝耳病毒(PRRSV)酶联免疫分析(ELISA)

试剂盒使用说明书

本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定猪血清，血浆及相关液体样本中猪蓝耳病毒(PRRSV)的含量。

实验原理：

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中猪猪蓝耳病毒(PRRSV)水平。用纯化的猪猪蓝耳病毒(PRRSV)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入猪蓝耳病毒(PRRSV)，再与HRP标记的猪蓝耳病毒(PRRSV)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的猪蓝耳病毒(PRRSV)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中猪猪蓝耳病毒(PRRSV)浓度。

试剂盒组成：

试剂盒组成	48孔配置	96孔配置	保存
说明书	1份	1份
封板膜	2片（48）	2片（96）
密封袋	1个	1个
酶标包被板	1×48	1×96	2-8℃保存
标准品：225ng/L	0.5ml×1瓶	0.5ml×1瓶	2-8℃保存
标准品稀释液	1.5ml×1瓶	1.5ml×1瓶	2-8℃保存
酶标试剂	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃保存
样品稀释液	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃保存
显色剂A液	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃保存
显色剂B液	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃保存
终止液	3ml×1瓶	6ml×1瓶	2-8℃保存
浓缩洗涤液	（20ml×20倍）×1瓶	（20ml×30倍）×1瓶	2-8℃保存

样本处理及要求：

1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.

7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3

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