基本信息

货号：21202（1 mg）

储存条件：-20℃避光

简介

细胞内pH在许多细胞事件中起着重要的调节作用，包括细胞生长，钙调节，酶活性，受体介导的信号转导，离子转运，内吞作用，趋化性，细胞粘附和其他细胞。近年来，pH敏感性荧光染料已被广泛应用于监测细胞内pH的变化。使用荧光pH指示剂的成像技术还允许研究人员使用其他技术（如微电极）实现更大的空间分辨率和采样密度来研究这些过程。其中，2'，7'-双 - （2-羧乙基）-5-（和-6） - 羧基荧光素（BCECF）是最常用的pH探针，因为它可用于比率监测细胞pH。 BCECF AM是BCECF的细胞渗透型。 AAT Bioquest开发了一种更好的版本，单一异构体化合物BCFL，AM使得pH测量比BCECF，AM更加可重复，它由相当多的不同异构体组成。

物理化学特性

分子量：~808.69

溶剂：二甲基亚砜（DMSO）

光谱特性：Ex / Em = 503 / 528nm

标准细胞的测定方案

在生长培养基中制备细胞®

添加等体积的BCECF，AM染料上样溶液（100μL/孔用于96孔板）在37℃下孵育1小时®

洗涤并用HHBS替换®

读取荧光，在Ex / Em = 490 / 535 nm，加入50μL/孔化合物（或505/535和430/535 nm比例）

注意：以下是标准单元负载的推荐步骤。 该步骤仅提供指导，应根据具体需要进行修改。

1.根据需要准备细胞。 例如，将粘附细胞在生长培养基中以40,000至80,000个细胞/孔/100μL过夜，96孔或10,000至20,000个细胞/孔/25μL，用于384孔板。

注意：应对每个细胞系进行单独评估，以确定最佳细胞密度。

2.准备BCECF，AM染料加载溶液：

2.1在高质量无水DMSO中制备2至20 mM BCECF，AM原液。 应立即使用原液。 任何未使用的溶液需要等分并在<-20 oC重新冷冻。

注意：避免反复冻融循环，避免光照。

2.2在Hanks和20 mM Hepes缓冲液（HHBS）中制备5-50 uM BCECF，AM染料加载溶液

3.运行pH分析

3.1将100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）BCECF，AM染料加载溶液加入细胞板（来自步骤2.3）。

注意：如果您的化合物干扰血清，重要的是用HHBS缓冲液替换生长培养基（96孔板100μL/孔或染料加载前384孔板25μL/孔）。

3.2将染料加载板在细胞培养箱中孵育30至60分钟。

3.3用HHBS洗涤并更换染料加载溶液。

3.4使用HHBS或所需的缓冲液制备复合板。

3.5通过监测Ex / Em = 490 / 535nm（在515nm处截止）或505 / 535nm和430 / 535nm（在515nm处截止）处的荧光进行pH测定以进行比率测量。 添加化合物为50μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）。

注意：化合物应在化合物添加后3至5分钟内完成，但在测定开发过程中建议至少8分钟的数据收集。