基质胶全揭秘，常见问题迎刃而解！
随着科学的进步，由于传统细胞体外培养的局限性，类器官细胞培养在临床研究中的应用越来越多，NEST整合公司多方资源，致力于为客户提供类器官培养最前沿的产品管线和技术服务。
其中GelNest™基质胶在体外3D培养中发挥着至关重要的作用。
GelNest™基质胶主要是模拟体内细胞基底膜的结构、组成、物理特性和功能，可以有效促进正常细胞、转染细胞、贴壁生长的上皮细胞等细胞的粘附和分化，包括神经细胞，肝细胞，动物上皮细朐及黑素瘤等，能够提高细胞培养的成功率和效果。同时在类器官培养、类器官药物敏感实验以及Transwell细胞体外侵袭实验都发挥着重要的作用。
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GelNest™基质胶成分解读
1. GelNest™基质胶中含有DNA或RNA吗？
含有，GelNest™基质胶没有经过DNase或RNase消化处理，可能会含有痕量的DNA、RNA。此外，因为基质胶中含有痕量的RNA，进行RNA分析时，应设一个GelNest™基质胶(不接种细胞的对照组)。
2. GelNest™基质胶中含有血管内皮生长因子(VEGF)和金属蛋白酶(MMPs)吗？
标准型的GelNest™基质胶中含有5.0-7.5ng/ml的血管内皮生长因子(VEGF)；
低生长因子的GelNest™基质胶中的VEGF含量为1.0-1.5ng/mL；
另外，GelNest™基质胶中可能还含有小鼠肿瘤细胞来源的痕量的金属蛋白酶(MMPs)。
3. GelNest™基质胶中含有LDEV吗？
不含。GelNest™基质胶经免疫方法及PCR方法检测，并不含有乳酸脱氢酶增高病毒(LDEV)或者乳酸脱氢酶增生病毒(LDHV)，同时也未发现细菌、真菌和支原体。
4. GelNest™基质胶含中有尿素吗？
不含。
5. GelNest™基质胶中使用的什么缓冲液？
低糖DMEM (1g/L)，其中包含50µg/mL庆大霉素。
6. GelNest™基质胶中含有纤维连接蛋白吗？
经Western Blot检测，在GelNest™基质胶中发现了微量的纤维连接蛋白。
7. GelNest™基质胶中含有玻璃体结合蛋白吗？
某些组织中可能含有微量的血液，因此GelNest™基质胶中可能会有痕量的玻璃体结合蛋白。
8. GelNest™基质胶中还有什么别的物质？
GelNest™基质胶中还可能含有浓度小于0.02%的三氯甲烷，以及肿瘤细胞的产生的其它未知蛋白或分子。
近20年，基质胶被广泛的应用于细胞分化、血管形成和肿瘤生长有关的研究，建立了许多的细胞分化模型、血管生成和肿瘤恶性程度相关检测方法。当细胞分化后，可以将其移植回动物，替代病变或缺损的组织。未来基质胶在体新型类器官模型构建、体外肿瘤细胞生物学特性研究及其他细胞方面的应用也一定会越来越广泛。GelNest™基质胶特别是在组织工程、细胞培养和研究等方面，可被用于类器官培养、干细胞分化、血管生成、迁移或侵袭和体内肿瘤发生等研究。
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GelNest™基质胶应用指导
1. 什么情况下需要使用不含酚红的GelNest™基质胶？
对于涉及颜色检测的实验，推荐使用不含酚红的GelNest™基质胶，如使用荧光染料对内皮细胞成管的定量；
对子宫内膜细胞培养必须使用不含酚红的GelNest™基质胶。
不含酚红的GelNest™基质胶也可以应用于一些体内应用研究。因酚红与一些非甾体雌激素结构相似，有显著的雌激素活性，在实验动物体内可能具有干扰内分泌与荷尔蒙代谢的能力。此外，酚红是一种潜在的内分泌干扰物，有可能会干扰实验动物体内激素的自然产生和代谢能力。
2. 高浓度GelNest™基质胶可以用于哪些实验？
高浓度GelNest™基质胶可用于3D细胞培养、裸鼠体内成瘤实验等体内应用研究。高浓度GelNest™基质胶的蛋白浓度高，和肿瘤细胞一起皮下注射到小鼠体内后保持其完整性并保持原位，以便进行原位分析或未来肿瘤的取样。
3. 哪些情况下应该选用薄胶法/厚胶法？3D细胞培养有哪些应用？
薄胶法主要用于细胞贴壁和增殖，如原代细胞培养仅需要一层薄薄的蛋白层辅助而非蛋白基质；
厚胶法主要用于3D细胞培养，成环试验，如大鼠主动脉组织分化为毛细管样结构，以及进行细胞侵袭实验等。
3D细胞培养实验，主要是用于研究细胞与细胞间的相互作用以及复杂结构等。
4. GelNest™基质胶可以用于诱导ES/iPS细胞分化的研究吗？
可以，实验表明GelNest™基质胶可以用于ES/iPS细胞的分化研究，建议使用干细胞专用的GelNest™基质胶。
5. 如何从GelNest™基质胶中收获细胞？
推荐使用中性蛋白酶，如分散酶来收获培养在GelNest™基质胶中的细胞。
中性蛋白酶相比胰蛋白酶、胶原蛋白酶或其它蛋白水解酶能够更温和有效地获得单细胞悬液，不会损伤细胞或分裂细胞表面蛋白。对于需要继续接种培养或生物检测的细胞，使用中性蛋白酶不会产生损伤，此外中性蛋白酶也可以用于组织的分离。
也可使用相应的细胞复苏溶液进行代谢实验和RNA回收实验，建议在4℃使用细胞复苏溶液进行非酶反应的细胞收获。
其它方法：降低温度至4-6℃使基质胶解聚，这需要一定的时间并且仅适合一部分应用；或者离心以破坏基质胶结构。
6. 使用GelNest™基质胶培养的细胞，如果需要进行切片或者免疫组织化学及免疫荧光检验，该怎样固定呢？如何避免解聚？
可以使用2-4%多聚甲醛进行固定，如2-4%多聚甲醛配制在PBS中，室温固定20分钟。某些情况下，在固定后可能出现解聚的情况，可以加入1%戊二醛(戊二醛作为固定剂，常用于电镜检测)。
如果需要进行免疫荧光检验，加入戊二醛后，会出现明显的背景荧光。为了解决这一问题，建议操作中在固定之后，使用NaBH4进行淬灭。NaBH4极易起泡，进行该步骤时，必须在水平操作台上小心操作，避免晃动，尽量减少气泡的形成。另外，也可以尝试使用较低浓度(如0.1%到0.5%)的戊二醛进行固定，浓度越低，背景荧光信号越少。
7. 提取过程会引起层粘连蛋白变性吗？
不会引起层粘连蛋白变性。
注：NEST提供的各种基质胶应用方案仅供参考，实际须根据实验目的进行条件的优化。
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