登革热疫情突袭！暂无针对登革热的抗病毒特效药

美洲地区2024年报告的登革热病例数是去年同期的3倍。据巴西卫生部的数据显示，2024年巴西登革热疑似及确诊病例已超410万，死亡1937人。9月18日，广东省疾病预防控制局公布2024年8月全省法定传染病疫情概况，全省共报告登革热1220例，较7月（233例）增长987例。今年5月起，广东部分地区已陆续报告登革热本地病例。

2024年以来，全球登革热疫情形势严峻，流行强度显著超过历年同期水平，东南亚、美洲国家登革热疫情不断攀高。登革病毒的传播，已经成为热带、亚热带地区严重的公共卫生问题和重大疾病负担。登革热的发病具有季节性，一般在每年的5～11月份，高峰在7～9月份，人群普遍易感（图1）。

图1.登革热症状图示

登革热是由登革病毒（dengue virus,DENV）引起的急性传染病，主要通过埃及伊蚊或白纹伊蚊叮咬传播。登革热病毒是黄病毒科的一员，黄病毒属（Flavivirus）是一大群具有包膜的单正链RNA病毒。目前，没有针对登革热的特效抗病毒治疗药物。DENV依抗原性不同分为1、2、3、4四个血清型，其中2型传播最广泛。登革病毒基因组由大约11kb的RNA组成。这种RNA编码形成病毒体成分的3种结构蛋白(C、prM和E)和7种参与病毒RNA复制的非结构蛋白(NS1、NS2A/B、NS3、NS4A/B、NS5)。理想的药物需要对所有血清型登革病毒都有效，而登革热的症状与其他由蚊子传播的寨卡病毒和基孔肯雅病毒相似，所以理想的新药开发还要求能有一种对所有蚊媒病毒都有效的广谱抗病毒药物，以便在感染早期阶段得以使用。

针对登革病毒的新药研发，迪福润丝生物可提供真病毒的中和抗体检测与针对蛋白酶靶点的药物筛选与评价的联合开发，为提供更有效的抗病毒化合物发现做出力所能及的贡献。

登革真病毒中和抗体检测

迪福润丝生物提供基于荧光斑点计数法的中和抗体检测服务（图2），该检测方法灵敏度高、检测迅速，并且该实验方法的特异性、重复性均能满足中和实验的要求，适用于高通量样本的检测。

图2. 登革真病毒中和抗体检测流程图

Created with biorender.com 

服务内容

针对登革病毒的蛋白酶抑制剂筛选

新型登革热病毒蛋白酶抑制剂的发现对于抗登革热药物研发至关重要，在大量化合物中寻找DENV蛋白酶抑制剂的过程中，行业急需一种可实现无需活病毒参与的细胞水平的正向筛选方式。由迪福润丝生物独家开发的蛋白酶抑制剂筛选系统，可在细胞水平直接模拟病毒自然感染过程，杜绝漏筛和假阳性等情况，可在新药发现阶段快速筛选大量化合物。

1）最简便

肉眼观测

DIFF蛋白酶抑制剂筛选系统可通过肉眼直接观察药物反应的荧光变化（图3），进行定性判断。

图3. 以新冠阳性药物GC376为例，添加不同浓度新冠3CL蛋白酶抑制剂后，

24h,48h,72h细胞GFP表达情况如上图所示

2）最准确

原理可靠

本系统基于特制质粒的共表达机制，以新冠病毒为例，结合重组绿色荧光蛋白（rGFP）和冠状病毒3CL蛋白酶。在该系统中，rGFP序列中嵌入了3CL蛋白酶的特异性切割位点。当3CL蛋白酶功能正常时，会特异性裂解rGFP，导致其荧光功能丧失，荧光强度减弱。相反，当抑制剂有效抑制了3CL蛋白酶的活性时，rGFP无法被切割，维持其完整性并正常发出荧光，荧光强度增强（图4）。药物有效性与荧光强度成正相关，是一种更直观的正向筛选方式。

图4. DIFF蛋白酶抑制剂筛选系统原理图

结果准确

系统实验结果与真病毒检测结果高度一致（图5）。

图5. 使用活病毒进行检测，GC376的IC50值为4.69μM；而采用DIFF筛选系统，IC50值为6.44μM，两种方法测得的IC50值高度相近。

图6. 添加不同浓度新冠蛋白酶抑制剂72h后荧光检测值

3）可进行高通量筛选

系统检测的荧光值低而信噪比好，可联合现有药物库，一周迪福即可筛选1万-10万个登革热药物候选化合物，快速锁定有效药物（图7）。

图7. 高通量筛选操作示意图