试剂盒使用说明书
本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于检测牛血清，血浆及相关液体样本中细小病毒I型 （PV-I）水平，感染人的血液学诊断。
实验原理：
本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫法（ELISA）测定标本中牛细小病毒I型 （PV-I）。用纯化的牛细小病毒I型 （PV-I）抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中细小病毒I型 （PV-I）相结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后再与HRP标记的细小病毒I型 （PV-I）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中牛细小病毒I型 （PV-I）的存在与否。
试剂盒组成：
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试剂盒组成 |
48孔配置 |
96孔配置 |
保存 |
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说明书 |
1份 |
1份 |
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封板膜 |
2片（48） |
2片（96） |
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密封袋 |
1个 |
1个 |
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酶标包被板 |
1×48 |
1×96 |
2 |
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阴性对照 |
0.5ml×1瓶 |
0.5ml×1瓶 |
2 |
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阳性对照 |
0.5ml×1瓶 |
0.5ml×1瓶 |
2 |
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酶标试剂 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2 |
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样品稀释液 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2 |
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显色剂A液 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2 |
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显色剂B液 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2 |
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终止液 |
3ml×1瓶 |
6ml×1瓶 |
2 |
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浓缩洗涤液 |
（20ml×20倍）×1瓶 |
（20ml×30倍）×1瓶 |
2 |
样本处理及要求：
1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于
7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤：
1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）
2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔