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Duolink® PLA®技术—新型蛋白研究工具,前沿科研领域之星

作者:sigma-aldrich西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司 2014-10-16T14:50 (访问量:17892)

Duolink® PLA®技术—新型蛋白研究工具,前沿科研领域之星


您是否正在研究低丰度蛋白但找不到合适的检测方法?
您是否正在研究蛋白相互作用但得不到令人信服的结果?
您是否担心蛋白过表达或融合标签后会改变其原有的功能?

现在,您再也不用担心了,因为有了Duolink® PLA®技术,所有这些问题都将迎刃而解。

Duolink®实验基于邻位连接技术(Proximity Ligation Assay, PLA),当一对PLA probes足够接近时(<40 nm)会产生PLA信号,PLA信号的位置直接反映了蛋白表达量或蛋白复合体的亚细胞定位。
 

Duolink® PLA®技术特点:

> 更真实:内源表达水平检测,不改造、修饰细胞
> 灵敏度高:信号扩增使其具有单分子级灵敏度
> 更精确:两种一抗同时识别,极大提高特异性
> 原位显示:同时完成目的蛋白的定位、定量检测
> 高通量:使用多孔板和配套软件实现高通量筛选
> 简单快捷:无需裂解细胞、纯化蛋白或WB检测



Duolink® 应用举例

1、 检测稳定、瞬时和微弱的蛋白互作

Fig. 1 加入雌二醇培养48 hr的大鼠胚胎海马神经元,原位显示ER α与DYX1C1在神经突触中的互作。
红色:ER alpha/DYX1C1复合物;绿色:actin蛋白;蓝色:细胞核

2、检测蛋白的翻译后修饰

Fig. 2  EGF刺激前后,用免疫荧光染色和PLA方法检测U343细胞中EGFR磷酸化水平的变化。PLA方法可以检测到EGFR的激活,而IF方法则不能。
红色:磷酸化的EGFR蛋白;蓝色:细胞核

3、高灵敏性的检测低丰度蛋白的表达

Fig. 3 分别用免疫荧光(左下图)和PLA方法(上图)检测A431细胞中EGFR的表达。与IF方法相比,PLA方法的信噪比高出100倍。
红色:EGFR蛋白;蓝色:细胞核

 

更多详情,请访问sigma.com/duolink

 

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