我们可能都有过这样的顾虑，人胚肾细胞为何有这么多名字？他们都有什么区别？我们该如何选择？本期给大家总结这四个细胞的区别和培养细节吧！


背景

HEK-293人胚肾细胞：是用5型腺病毒75株系转化，含有Ad5 E1区的人胚肾亚三倍体细胞系，是一种E1区缺陷互补细胞系。它是加拿大McMaster University的F.L.Graham与J.S.Miley于1976年用DNA转染技术构建而成。该细胞为人类腺病毒载体扩增的宿主。可表达异常的玻连蛋白的细胞表面受体，由整合素β1亚单位和玻连蛋白受体α-v亚单位组成。

HEK-293T人胚肾细胞：人胚肾细胞293细胞插入SV40 T-抗原基因后产生的高转染效率的衍生株称为293T。该细胞最初的名字是293tsA1609neo，携带SV40复制序列，被广泛用于逆转录病毒生产、基因表达和蛋白表达。

HEK-293FT人胚肾细胞：该细胞稳定表达SV40大T抗原，并且促进最适病毒产物的产生。293FT细胞能制造高滴度的慢病毒。

293A人胚肾细胞:细胞来源于人肾纤维母细胞，组成性表达 E1A 和 E1B 蛋白。

从背景知识我们应该知道怎么选择所需求的细胞了吧!

形态

293T

人胚肾细胞

人胚肾细胞是贴壁依赖型呈上皮样细胞，表现出典型的腺病毒转化细胞的表型，哺乳细胞的大规模培养方式有三种：贴壁培养、微载体培养、无血清悬浮培养。这三种方式均可用于人胚肾细胞细胞的大规模培养。

人胚肾细胞培养特性

大家都知道人胚肾细胞在运输、高密度、偏碱性环境、低温等情况下很容易漂浮脱落。如果您是购买的复苏好的培养瓶，收到货时可能会是这样的：

1遇到这样该怎么处理?

1、建议收到细胞后放培养箱静止2h-4h后观察细胞是否再次恢复贴壁;

2、如果贴壁可去除培养基轻柔pbs洗一次后，加入Trypsin作用30s-60s镜下观察细胞变圆,就可加DMEM完全培养基终止消化，吹打4-6次至细胞全成单个悬浮细胞即可。12小时-24小时90%以上细胞会贴壁；

3、如果细胞没有恢复贴壁，可以收集培养瓶内液体离心1000转5min收集细胞，接种到新培养瓶，添加新鲜的完全培养基，T25培养瓶建议加7ml完全培养基;

4、必要时加使用多聚赖氨酸、纤连蛋白进行包被，促进细胞的延展和贴壁;

2培养过程中的小细节：

1. 人胚肾细胞生长快速，当细胞传代时机为达80-90%汇合，传代比例建议为1：3；

2. 一般来讲，1:10传代后，一周可以长满。严禁高密度过度生长。不然会导致细胞密度加大和堆积消化后不分散;

3. 人胚肾细胞生长贴壁不牢固，观察时间长后容易飘浮，建议观察后立即进行处理或放入培养箱，换液时建议预热完全培养基；

4. 人胚肾细胞在低代数时容易贴壁，生长良好，在传到几十代以后，易聚集成团，且贴壁不牢，用PBS冲洗时即可能脱落，即使消化后也不容易吹打成单细胞悬液，最好购入时先大量冻存;

5. 人胚肾细胞生长明显适应酸性环境,pH值在6.9～7.1时,可顺利贴壁生长, 换液时动作要轻。一般用高糖的DMEM培养基；

6. 人胚肾细胞复苏时贴壁很慢，复苏接种后24小时内,应尽量减少观察细胞次数或不作观察,以免因晃动而影响细胞贴壁。复苏后48小时左右观察贴壁情况并进行首次更换培养基比较合适,如果用一次性塑料培养瓶可增加细胞贴壁牢度。换液前宜将培养基预热;

3转染小攻略

1、建议使用10代内的细胞进行包转染；

2、体外应用293细胞进行细胞转染时，如果是采用磷酸钙转染、慢病毒包毒液时，一定要注意293细胞不要全部长满细胞培养盘，高密度细胞加入磷酸钙就会使293细胞大片的脱落，最好是当293生长到1/2或2/3时进行磷酸钙转染，可以避免细胞的大量脱落；

3、慢病毒感染后可收取两次病毒液，48H建议用正常血清浓度培养收毒，72h时建议使用低浓度血清进行培养，这样收的毒液滴度大大增加；

4、必要时候用大瓶培养比小瓶要好，这样有利于293均匀的分布，利于营养的摄取，病毒颗粒的释放；

我司提供慢病毒构建的稳转株服务使用的是293FT细胞，该细胞转染效率高、慢病毒滴度高，有效运用于细胞系的红色、绿色、LUC等细胞系的标记。

PC-3-GFP标记

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