类器官的培养是一种利用干细胞技术，模拟人体内器官发育过程，构建出具有类似器官结构和功能的三维细胞培养模型。这种模型能够帮助科学家更好地理解器官的发育、疾病的发生机制以及药物的作用效果。类器官一般通过诱导和干预进行类器官的纯化，传代也是培养类器官不可缺少的步骤；

但是消化类器官总是会莫名奇妙的出问题 ，有些类器官半天消化不下来，有些类器官换个液都能给冲下来，类器官怎么消化，来看看我们的总结吧！

一、如何判断类器官可以消化了，小启经常采用以下三个方面来判断：

1.更换新鲜的培养基后，第二天培养基就变黄了，并且类器官在4X镜下整体有50%以上的汇合；

2. 有少部分类器官和细胞发生脱落现象，从Matrigel中脱离，漂浮在培养基中；

3. 细胞覆盖Matrigel液滴的边缘，显微镜下已经看不到Matrigel胶，整个底部都是迁移的类器官。

判断好类器官可以进行消化了，我们就来整理下小启在消化类器官踩的坑吧：

第一坑：打死都消化不下来的类器官：

脑癌类器官以培养时间长著称，正常的培养没个把月根本测不出类器官指数，于是消化成了这个细胞的难点 ，类器官培养的经验教训之一：培养的类器官在同一个孔中尽量不要时间太久， 越久越消化不下来，

培养超过一个月的类器官，不建议使用直接使用组织消化液消化，采用以下步骤消化类器官

1. 先用刮刀先把类器官刮下来，加适量的PBS洗涤后，收集到离心管中；

2. 采用100um的细胞滤网过滤，以拦截比较大块的类器官；

3. 准备新的离心管，将滤网反转用PBS冲洗，将大的类器官冲洗下来；

4. 将冲洗的类器官混悬液进行离心去除PBS，加入适量的组织消化液消化；37°水浴消化5分钟后，用1000ul枪头轻轻吹打20次左右，立刻加入同等的完全培养基终止。

5. 配平，1500转离心3分，对于比较容易分散的类器官，如肝癌和肾癌类器官，可以采用瞬离的方法，瞬离的方法如下：设定转速3000转，配平，启动离心机，当转速达到3000转后立即按下停止键，待离心机停止转动后，拿出离心管。

                                       脑癌类器官消化后重新铺板

第二坑：轻轻一碰就掉落的类器官

肝癌和滋养层是最容易掉落的类器官，即使有Matrigel给其吸附，但是稍不注意换个液都能掉落，前功尽弃，而且这类的类器官有趋光性，一旦Matrige稍微铺的不均匀或者震板没有做好，就大的很大，小的很小，而越大的越容易掉落，看着都恼火

                                      组织消化酶（启达生物，货号：SD0013)

消化容易脱落的类器官采用的方法：

1. 预热组织消化酶，一定要预热；

2. 去除旧的培养基，向每个孔中加入500ul预热的组织消化酶，以从Matrigel中回收类器官

3. 轻轻吸取组织消化酶和Matrigel液滴混合物上下2-3次，将Matrigel和类器官从孔中移出。

4. 将混悬液转移到新无菌15 mL离心管中，每个15mL离心管最多可容纳8个孔的类器官（即：体积约为4-6mL）

5. 将混合物在37℃水浴中孵育5分钟，偶尔旋转试管以混合类器官消化酶;

6. 用1000ul移液管抽吸类器官混悬液20-30次，以机械方式破坏和分离类器官为单细胞

7. 用相同体积的完全类器官培养基中和组织消化溶液

8. 将试管在1500转下离心3分钟；

9. 铺在预先准备的培养板中继续培养或者冻存；